| Source DB | fr |
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| Institution | ULiège |
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| Code | 26_12783 |
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| Unit | ULiège_u001
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| Begin | 10/1/2019 |
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| title fr | Culture du tissu testiculaire prépubaire congelé pour restaurer la fertilité après cancer: conception d'un système microfluidique pour induire la spermiogénèse et améliorer l'efficience
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| title nl |
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| title en | In vitro maturation of cryopreserved prepubertal testicular tissue to restore fertility after cancer: conception of a microfluidic system to induce spermiogenesis and improve spermatogenesis yield
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| Description fr | Notre projet a pour but de développer une stratégie de préservation de la fertilité des garçons prépubères cancéreux nécessitants un traitement gonadotoxique. La maturation in vitro des cellules spermatogoniales souches contenues dans un prélèvement testiculaire cryopréservé jusqu'au stade de spermatozoïde est une option pour donner l'espoir à ces garçons de devenir parents. Suite aux progrèsrécents obtenus chez la souris avec les systèmes de culture microfluidiques, nous planifions, de développer un système de culture microfluidique innovant pour mieux imiter les conditions in vivo du testicule en termes d'apport en oxygène et nutriments.Des fragments de TTI provenant de 3 patients (âgés de 1,7 et 10 ans) seront mis en culture dans ce système et parallèlement dans notre système de culture précédent. Aux jours 16,32 et 64 les fragments seront analysés pour : -Le nombre et type de spermatogonies, les spermatogonies en prolifération et l' apoptose respectivement par immunohistochimie pour MAGE-A4 et PLZF, double marquage Ki67/Vimentine, et Caspase 3 et TUNEL.-La différenciation des cellules germinales par analyse morphologique et qRT-PCR (CREM et Acrosine pour les cellules méiotiques et post-méiotiques respectivement)-La ploïdie par chromogenic in situ hybridization
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| Description nl |
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| Description en | This research project aims at preserving the fertility of prepubertal boys facing gonadotoxic treatments for cancer. One strategy to restore fertility is in vitro maturation of spermatogonial stem cells contained in small cryopreserved testicular biopsy up to thestage of mature sperm to give these boys the hope to father their own child. Considering recent advances with microfluidic culture systems in increasing the efficiency of spermatogenesis in mice, we plan to develop a novel microfluidic pump-based organ culture system to better mimic in vivo conditions of the testis in terms of oxygen and nutrient support. Testicular tissue retrieved from 3 patients (1, 7 and 10 years old) will be cultured using the microfluidic device that provides a continuous culture media flow and compare it to our original organotypic culture system. At day 16, 32 and 64 of culture the tissue fragments will be analysed for: -Number and type of spermatogonia, proliferating spermatogonia and apoptotic activity identified with MAGE-A4 and PLZF immunohistochemistry, double Ki67/Vimentin immunostaining and Caspase 3 and TUNEL assessment, respectively.-Germ cell differentiation via morphologicalanalysis and qRT-PCR (CREM, Acrosin for meiotic and postmeiotic germ cells, respectively) -Ploidy via chromogenic in situ hybridization Culture supernatants will be analysed on a weekly basis for: -Testosterone, Stem cell factor and Inhibin B for Leydig and Sertoli activity respectively -pH.
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